Pro-inflammatory mediators expression by pulp cells following tooth whitening on restored enamel surface

Abstract This paper aimed to assess the influence of adhesive restoration interface on the diffusion of hydrogen peroxide (H2O2), indirect toxicity, and pro-inflammatory mediators expression by odontoblast-like cells, after in-office tooth whitening. Dental cavities prepared in bovine enamel/dentin discs were adhesively restored and subjected or not to hydrolytic degradation (HD). A whitening gel with 35% H2O2 (WG) was applied for 45 min onto restored and non-restored specimens adapted to artificial pulp chambers giving rise to the groups: SD- intact discs (control); SD/HP- whitened intact discs; RT/HP- restored and whitened discs; and RT/HD/HP- restored and whitened discs subjected to HD. The extracts (culture medium + WG components diffused through enamel/dentin/restoration interface) were collected and applied to odontoblast-like MDPC-23 cells. The study evaluated the amount of H2O2 in the extracts, as well as the cell viability (CV), cell morphology (CM), and gene expression of inflammatory mediators (TNF-α and COX-2) by the pulp cells exposed to the extracts (ANOVA and Tukey tests; 5% significance). All whitened groups presented lower CV than SD (control; p<0.05). The highest CV reduction and gene expression of TNF-α and COX-2 was observed in the RT/HD/HP group in comparison with SD/HP and RT/HP (control; p<0.05). CM alterations occurred in all whitened groups. The intensity of these cell side effects was directly related with the amount of H2O2 in the extracts. We concluded that adhesive restoration of dental cavity increases the H2O2 diffusion after in-office whitening, enhancing the indirect toxicity of this therapy and trigger pro-inflammatory overexpression by MDPC-23 cells.

Resumo Este trabalho teve como objetivo avaliar a influência da interface de uma restauração adesiva na difusão do peróxido de hidrogênio (H2O2), toxicidade indireta e expressão de mediadores pró-inflamatórios por células odontoblastóides, após clareamento dental em consultório. Cavidades dentárias preparadas em discos de esmalte / dentina foram restauradas com adesivo e submetidas ou não à degradação hidrolítica (HD). Um gel clareador com 35% H2O2 (WG) foi aplicado por 45 min em discos restaurados e não restaurados adaptados às câmaras pulpares artificiais dando origem aos grupos: SD- discos intactos (controle); SD / HP - Discos intactos clareados; RT / HP - discos restaurados e clareados; e RT / HD / HP - discos restaurados, clareados e submetidos a HD. Os extratos (meio de cultura + componentes WG difundidos através da interface esmalte/dentina/restauração) foram coletados e aplicados em células odontoblastóides MDPC-23. Foi avaliada a quantidade de H2O2 nos extratos, bem como a viabilidade (CV), morfologia (CM) e expressão gênica de mediadores inflamatórios (TNF-α e COX-2) pelas células pulpares expostas aos extratos (ANOVA e testes de Tukey; 5% de significância). Todos os grupos clareados apresentaram menor CV do que SD (controle; p <0,05). A maior redução CV e expressão gênica de TNF-α e COX-2 foi observada no grupo RT / HD / HP em comparação com SD / HP e RT / HP (controle; p <0,05). Alterações na CM ocorreram em todos os grupos clareados. A intensidade desses efeitos celulares teve relação direta com a quantidade de H2O2 nos extratos. Concluímos que a presença de uma cavidade contendo restauração adesiva aumenta a difusão de H2O2 após o clareamento em consultório, o que, por sua vez, aumenta a toxicidade indireta dessa terapia e desencadeia a expressão de mediadores pró-inflamatórios pelas células pulpares MDPC-23.

Tratamiento de caries relacionada a radiación: una revisión de literatura

Resumen Caries relacionada a radiación es una complicación tardía frecuente de la radioterapia de cáncer de cabeza y cuello, ocasionada por efectos directos e indirectos de la radioterapia. El objetivo del presente trabajo es realizar una revisión y analizar literatura sobre el manejo de caries relacionada a radiación, materiales usados, fallas en el tratamiento y protocolo con mejores resultados; tres revisores independientes realizaron una búsqueda en diferentes bases de datos: PubMed, Lilacs y Web Of Science, determinando criterios de inclusión y exclusión para la selección. Estudios clínicos y revisiones indicaron que los materiales más usados son cemento ionómero de vidrio convencional, cemento ionómero de vidrio modificado con resina y resina compuesta con aplicaciones de flúor. Son necesarios más estudios para definir el mejor tratamiento que incluya técnica de preparación de la cavidad y material restaurador con mejores resultados. Se recomienda realizar estudios comparando diferentes sistemas adhesivos, concentraciones de flúor y restauraciones en dentina radicular.

Resumo Cárie relacionada à radiação é uma complicação tardia frequente da radioterapia de câncer de cabeça e pescoço, ocasionada por efeitos diretos e indiretos da radioterapia. O objetivo do presente trabalho é realizar uma revisão e analisar literatura sobre o tratamento de cárie relacionada à radiação, materiais usados, falhas no tratamento e manejo com melhores resultados; foi realizada uma busca em diferentes bases de dados: PubMed, Lilacs e Web Of Science, por três revisores independentes, usando critérios de inclusão e exclusão. Estudos clínicos e revisões de literatura indicam que os materiais mais usados são cimento de ionômero de vidro convencional, cimento de ionômero de vidro modificado com resina e resina composta com aplicações de flúor. Mais estudos são necessários para definir o melhor tratamento que inclua a técnica de preparo cavitário e material restaurador com melhores resultados. Recomenda-se a realização de estudos comparando diferentes sistemas adesivos, concentrações de flúor e restaurações em dentina radicular.

Abstract Radiation-related caries are a frequent late complication caused by the direct and indirect effects of head and neck cancer radiotherapy. This study aimed to review and analyze the literature on managing radiation-related caries, restorative materials, treatment failures, and treatment protocols. A search was conducted in Pubmed, Lilacs, and Web of Science by three independent reviewers, and inclusion and exclusion criteria were used for paper selection. According to clinical studies and literature reviews, the most used materials are conventional glass-ionomer cement, resin-modified glass-ionomer cement, and composite resin with fluoride applications. More studies are needed to determine the best treatment, including cavity preparation technique and restorative material with better results. We suggest conducting studies comparing various adhesive systems, fluoride concentrations, and root dentin restorations.

Is there an association between dental caries, fluorosis, and molar-incisor hypomineralization?

Abstract Objective: This cross-sectional study aimed to determine the prevalence of dental caries, dental fluorosis, and molar-incisor hypomineralization, and their associations in a group of Brazilian schoolchildren. Methodology: Adolescents (n=411) were evaluated by two calibrated examiners for dental caries (DC), dental fluorosis (DF), and molar-incisor hypomineralization (MIH) using the CAST (Caries Assessment Spectrum and Treatment) instrument, Thylstrup and Fejerskov (TF) index, and MIH Severity Scoring System (MIH-SSS), respectively. Descriptive statistics, chi-square tests, and logistic regression were used for statistical analysis. Results: The sample comprised 42.75% boys and 57.25% girls. The prevalence of DC in permanent dentition was 94.75%, of which 29% were represented by dentin lesions. For DF, a prevalence of 40.75% was observed, with 69.32% mild, 12.88% moderate, and 17.79% severe. A positive association between the source of water and fluorosis was detected (p=0.01). The prevalence of MIH was 18%. Thirty adolescents (41.7%) presented with severe MIH. No association was found between DF or MIH and dentin DC or between MIH and DF at the individual level. However, a significant negative relationship was detected between DF and dentin carious lesions ( p <0.005) and DF and MIH ( p <0.00001) at the tooth level, whereas a positive association was observed between MIH and dentin carious lesions ( p <0.00001). A positive association was also observed between the severity of both conditions ( p <0.00001). Mild DF was the most prevalent problem observed. Cases of teeth with mild MIH were the most predominant in MIH-affected teeth. Conclusions: No association was observed among the dentin carious lesions, MIH, and DF at the participant level. However, a positive association between MIH and dentin carious lesions was found at the tooth level, whereas MIH, DF, and DF and dentin carious lesions showed a negative relationship.

Impact of dental treatment on the oral health-related quality of life of Brazilian schoolchildren

Abstract: This before-after experimental study evaluated the impact of dental treatment on the oral health-related quality of life (OHRQoL) in children aged 6-8 years from Paranoá, DF, considering the presence or absence of cavitated dentin carious lesions pre- and post-treatment. The responsiveness and sensitivity of the questionnaires were also investigated. Caries was detected by using the Caries Assessment Spectrum and Treatment (CAST) instrument, while the impact of oral health on the children's health-related quality of life was assessed using the Brazilian version of the Child Perceptions Questionnaire (CPQ8-10), which was completed by the children and the Brazilian version of the Early Childhood Oral Health Impact Scale (B-ECOHIS), which was completed by their parents. Sociodemographic characteristics were also assessed. After the examinations, the children were categorized into two groups according to the presence (treatment/n = 34) or absence (control/n = 34) of cavitated dentin carious lesions. Restorative/curative care was provided to the treatment group, while the control group received preventive measures. OHRQoL was assessed at baseline and at four weeks post-treatment. No significant sociodemographic differences were observed between the groups. In the treatment group, the children and their families reported a greater impact of oral health on their OHRQoL in both questionnaires (p < 0.05). However, there was a significant reduction in the impact of oral health, with differences between the pre-treatment and post-treatment phases (p = 0.001). Good sensitivity and responsiveness were observed for both questionnaires. Dental treatment was found to reduce the negative impact of dental caries on OHRQoL in 6-8-year-old children, which was detected by both questionnaires (B-ECOHIS and CPQ8-10).

CAST instrument in epidemiological surveys: Results presentation in comparison to the WHO criteria / Uso do instrumento CAST em levantamentos epidemiológicos: apresentação dos resultados em comparação ao critério da OMS

Resumo O CAST (Caries Assessment Spectrum and Treatment) é um instrumento desenvolvido para a detecção de cárie a ser utilizado em levantamentos epidemiológicos. Foi validado e tem se mostrado efetivo, fornecendo um diagnóstico mais preciso do estado de saúde bucal do que o critério OMS, recomendado pela Organização Mundial da Saúde. O objetivo deste artigo é comparar a apresentação dos resultados de cárie dentária utilizando o instrumento CAST e o critério OMS, numa mesma população. Foram avaliados por dois examinadores treinados na utilização do instrumento CAST 680 escolares de 6 a 8 anos do Distrito Federal, Brasil. A avaliação constou do índice de placa visível (IPV) e do índice de sangramento gengival (ISG). Os escores CAST dente foram convertidos em componentes ceo/CPO e calculados os ceod/CPOD. Os pais responderam a um questionário sociodemográfico. A idade média foi 7,45 anos (± 0,91). A prevalência de cárie na dentição decídua foi de 65,44% e 61,61%, considerando o CAST e o critério da OMS, respectivamente; na dentição permanente: 38,19% e 10,2%, respectivamente. A média do ceod foi de 2.4 (± 2.7) e a média do CPOD 0.16 (± 0.53). o IPV foi associado a maiores CAST máximos p < 0,005. O instrumento CAST demonstrou maior sensibilidade em identificar a presença e gravidade de lesões cariosas quando comparado ao critério OMS.

Abstract Caries Assessment Spectrum and Treatment (CAST) is an instrument developed for caries detection to be used in epidemiological surveys; it has been validated and is believed to provide a clearer picture of the oral health status than the criteria provided by the World Health Organization (WHO). This article aims to compare the epidemiological survey results using the CAST instrument and the WHO criteria in the same population. 680 schoolchildren aged 6-8 years from Federal District, Brazil, were evaluated by two examiners trained to use the CAST. The visible plaque index (VPI) and gingival bleeding index (GBI) were also evaluated. The maximum CAST codes per tooth were converted into the dmf/DMF, the mean scores for primary and permanent dentition were calculated. The mean age was 7.45(± 0.91) years. The prevalence of caries differed when CAST and the WHO criteria were applied. In the primary dentition, it was 65.44% and 61.61%, and for the permanent dentition, 38.19% and 10.2%, respectively. It was possible to calculate the mean dmft [2.4(± 2.7)] and the DMFT [0.16(± 0.53)] using CAST. VPI was associated with higher maximum CAST scores p < 0,005. The way CAST results are presented showed a higher sensibility to identify the presence and severity of carious lesions in comparison to the WHO criteria.

Cytotoxicity of Universal, Self-Etching and Etch-and-Rinse Adhesive Systems According to the Polymerization Time

This in vitro study evaluated in fibroblast cultures the direct cytotoxicity of universal, self-etching and etch-and-rinse adhesive systems according to the polymerization time. Paper discs were impregnated with adhesives and light-cured (10, 20 or 40 s). The discs were then immersed in culture medium to obtain the eluates for the experimental groups (A1-Single Bond 2; A2-Scotchbond Multi-purpose; A3-Clearfil SE Bond; A4 Scotchbond Universal). As a negative control, paper discs were immersed in culture medium only. After 24 h or 7 days, the eluate obtained was applied on fibroblast culture. Cell viability, cell morphology, membrane damage and the presence of residual monomers were evaluated by MTT assay, SEM, flow cytometry and high-performance liquid chromatography (HPLC), respectively. Data were analyzed by Kruskal-Wallis and Mann-Whitney tests (=0.05). All adhesive systems significantly reduced 33-51% cell metabolism when compared to the negative control, regardless of polymerization time, storage period and adhesive system. Moreover, the adhesives caused intense morphological alterations and cell membrane damage. Toxicity was directly related to the presence of residual monomers in the eluates. Residual monomers and additional components are capable of reducing mitochondrial activity, causing morphological alterations and disruption of the cell membrane in fibroblasts, regardless of the polymerization time. This study highlights that despite the more complex composition of the universal adhesive system, its biological response was not more toxic when compared with other systems, even when the shortest polymerization time was tested in cell culture.

O presente estudo in vitro avaliou a citotoxicidade direta dos sistemas adesivos convencionais, autocondicionantes e universais de acordo com o tempo de polimerização em cultura de fibroblastos. Discos de papel foram impregnados com adesivos e fotoativados (10, 20 e 40 s). Os discos foram posteriormente imersos em meio de cultura para obtenção dos eluatos dos grupos experimentais (A1-Single Bond 2; A2-Scotchbond Multi-purpose; A3-Clearfil SE Bond; A4 Scotchbond Universal). Para o controle negativo, os discos de papel foram imersos somente em meio de cultura. Após 24 h ou 7 dias, o eluato obtido foi aplicado na cultura de fibroblastos. O metabolismo celular, morfologia, dano de membrana e presença de monômeros residuais foram avaliados por teste de MTT, MEV, citometria de fluxo e HPLC, respectivamente. Os dados foram analisados estatisticamente por Kruskal-Wallis e Mann-Whitney. Todos os sistemas adesivos reduziram significativamente o metabolismo celular em 33 a 51% quando comparados ao grupo controle, independente do tempo de polimerização, período de armazenamento e tipo de sistema adesivo. O eluato do adesivos causou ainda intensas alterações morfológicas e danos à membrana celular. A toxicidade foi diretamente relacionada à presença de monômeros residuais nos eluatos experimentais. Monômeros residuais e componentes adicionais dos sistemas adesivos foram capazes de reduzir a atividade mitocondrial, causar alterações morfológicas e danos à membrana citoplasmática de fibroblastos, independente do tempo de polimerização. Esse estudo evidencia que apesar de uma composição mais complexa do sistema adesivo universal, sua resposta biológica não apresentou maior toxicidade quando comparado aos demais sistemas, mesmo no menor tempo de polimerização quando testados em cultura celular.

Mineral Loss and Morphological Changes in Dental Enamel Induced by a 16% Carbamide Peroxide Bleaching Gel

The aim of this study was to compare the effect of a 16% carbamide peroxide (CP) gel and a 10% CP gel on mineralized enamel content and morphology. Enamel blocks from bovine incisors were subjected to a 14-day treatment (8 h/day) with 10% or 16% CP gels. Knoop microhardness was evaluated before bleaching and at 1, 7 or 14 days after this treatment (50 g/15 s). Mineral content (energy-dispersive x-ray spectroscopy), surface roughness and topography (atomic force microscopy) were evaluated at the 14-day period. Data were analyzed statistically by two-way ANOVA and Tukey's test (α=0.05). Significant microhardness reduction was observed at the 7 th and 14 th days for 10% CP gel, and for all bleaching times for 16% CP gel (p<0.05). At the 14-day period, a significant decrease in Ca and P content, increase on surface roughness (p<0.05) as well as on picks and valleys distance were observed when both bleaching gels were used. These enamel alterations were more intense for 16% CP gel. It was concluded that both CP-based gels promoted loss of mineral structure from enamel, resulting in a rough and porous surface. However, 16% CP gel caused the most intense adverse effects on enamel.

O objetivo do presente estudo foi comparar o efeito de um gel com 16% de peróxido de carbamida (PC) sobre a estrutura mineral e morfologia do esmalte dental com os efeitos de um gel com 10% de PC. Blocos de esmalte provenientes de incisivos bovinos foram submetidos a 14 dias de tratamento (8 h/dia) com géis com 10 ou 16% de PC. A microdureza Knoop foi avaliada antes do clareamento e 1, 7 e 14 dias pós-tratamento (50 g/15 s). O conteúdo mineral (EDX), rugosidade de superfície e topografia (MFA) foram avaliados no período de 14 dias (ANOVA a dois critérios e teste de Tukey; α=0,05). Redução significante na microdureza foi observada nos períodos de 7 e 14 dias para o gel com 10% de PC, e em todos os períodos para o gel com 16% de PC (p<0,05). No período de 14 dias, uma diminuição significante no conteúdo de Ca e P, aumento na rugosidade de superfície (p<0,05), bem como na distância entre picos e vales foram observados para ambos os agentes clareadores usados. Estas alterações foram mais intensas para o gel com 16% de PC. Pôde-se concluir que ambos os géis à base de PC promoveram perda de estrutura mineral do esmalte, resultando em superfície mais rugosa e porosa. Porém, o gel com 16% de PC causou efeitos adversos mais intensos no esmalte dental.

Effect of Fluoride-Treated Enamel on Indirect Cytotoxicity of a 16% Carbamide Peroxide Bleaching Gel to Pulp Cells

The aim of this study was to evaluate the possibility of fluoride solutions applied to enamel to protect pulp cells against the trans-enamel and transdentinal cytotoxicity of a 16% carbamide peroxide (CP) bleaching gel. The CP gel was applied to enamel/dentin discs adapted to aicial pulp chambers (8 h/day) during 1, 7 or 14 days, followed by fluoride (0.05% or 0.2%) application for 1 min. The extracts (culture medium in contact with dentin) were applied to MDPC-23 cells for 1 h, and cell metabolism (MTT assay), alkaline phosphatase (ALP) activity and cell membrane damage (flow cytometry) were analyzed. Knoop microhardness of enamel was also evaluated. Data were analyzed statistically by ANOVA and Kruskal-Wallis tests (α=0.05). For the MTT assay and ALP activity, significant reductions between the control and the bleached groups were observed (p<0.05). No statistically significant difference occurred among bleached groups (p>0.05), regardless of fluoride application or treatment days. Flow cytometry analysis demonstrated 30% of cell membrane damage in all bleached groups. After 14 days of treatment, the fluoride-treated enamel presented significantly higher microhardness values than the bleached-only group (p<0.05). It was concluded that, regardless of the increase in enamel hardness due to the application of fluoride solutions, the treated enamel surface did not prevent the toxic effects caused by the 16% CP gel to odontoblast-like cells.

Resumo O objetivo do presente estudo foi avaliar o possível efeito protetor de soluções fluoretadas aplicadas sobre o esmalte dentário frente à citotoxicidade trans-amelodentinária de um gel clareador com 16% de peróxido de carbamida (PC). O gel de PC foi aplicado sobre discos de esmalte/dentina adaptados a câmaras pulpares aiciais (8 h/dia) durante períodos de 1, 7 ou 14 dias, seguido de aplicação de soluções fluoretadas (0,05% ou 0,2%) durante 1 min. Os extratos (meio de cultura em contato com a dentina) foram aplicados sobre células MDPC-23 durante 1 h, seguido de análise do metabolismo celular (teste do MTT), atividade de fosfatase alcalina (ALP) e danos à membrana celular (citometria de fluxo). A microdureza Knoop do esmalte dental foi avaliada. Os dados foram analisados pelos testes de ANOVA e Kruskal-Wallis. Para o teste do MTT e atividade de ALP, redução significante entre os grupos controle e clareados foram observados (p<0,05). Nenhuma diferença entre os grupos clareados foi observada (p>0,05), independente da aplicação das soluções fluoretadas ou tempo de tratamento. A análise por citometria de fluxo demonstrou lesão à membrana celular em torno de 30% para todos os grupos clareados. Após 14 dias de tratamento, os espécimes clareados e fluoretados apresentaram aumento significante na microdureza do esmalte (p<0,05). Pôde-se concluir que apesar do aumento na dureza do esmalte decorrente da aplicação das soluções fluoretadas, este tratamento não preveniu os efeitos tóxicos causados pelo gel com 16% de PC sobre as células odontoblastóides. .

Efeito da terapia fotodinâmica antimicrobiana sobre culturas planctônicas e biofilmes de bactérias e fungos utilizando curcumina e cloro-alumínio ftalocianina veiculada por nanoemulsões / Effect of antimicrobial photodynamic therapy against planktonic and biofilm cultures of bacteria and fungi mediated by curcumin and aluminum-chloride- phthalocyanine entrapped in nanoemulsions

Esta investigação teve os seguintes objetivos: 1. avaliar in vitro o efeito da Terapia Fotodinâmica (PDT) utilizando diferentes concentrações de curcumina e doses de luz LED na inativação de suspensões planctônicas de S. aureus resistente (MRSA) e susceptível à meticilina (MSSA) e a citotoxicidade dos parâmetros antimicrobianos dessa terapia em cultura celular de fibroblastos; 2. o efeito fotodinâmico da cloro-alumínio ftalocianina (ClAlFt) veiculada em nano-emulsão catiônica e aniônica e comparar com ClAlFt diluída em solvente orgânico na inativação da C. albicans quando em suspensão planctônica e organizados em biofilmes; 3. o efeito antimicrobiano da terapia fotodinâmica utilizando a cloroalumínio ftalocianina em sistema de nanoemulsão em culturas planctônicas e biofilmes de bactérias gram-positivas (MSSA e MRSA). No primeiro estudo, suspensões de MSSA e MRSA foram tratadas com diferentes concentrações de curcumina (entre 0,1 a 20,0 µM) e expostas a diferentes fluências de LED azul (18; 25 e 37,5 J/cm2 ). Em seguida, diluições seriadas foram obtidas e alíquotas de 25 µl de cada diluição foram plaqueadas em meio de cultura Mannitol Salt Agar. Após o período de incubação de 48 horas a 37°C, as unidades formadoras de colônias foram determinadas (UFC/mL). Para as células L929, essas foram incubadas por 20 minutos com curcumina e irradiadas em seguida com LED (37,5 J/cm2 ). A viabilidade celular após a PDT foi avaliada utilizando o teste de MTT e as alterações morfológicas foram avaliadas pela microscopia eletrônica de varredura (MEV). Os resultados foram submetidos à análise descritiva, Análise de Variância (ANOVA) e post hoc de Tukey (α= 5%). As concentrações de 5, 10 e 20 µM resultaram em completa inativação do MSSA quando associadas a qualquer fluência de energia avaliada. Entretanto, somente a concentração de 20 µM associadas a dose de luz de 37,5 J/cm2 resultou em completa inativação do MRSA. Essa associação resultou em 80% de redução dos fibroblastos. Além disso, alterações na morfologia celular foram observadas, indicando que a membrana citoplasmática foi o principal alvo dessa terapia. Os controles de luz e curcumina não causaram alterações significativas tanto na contagem de colônias quanto nos valores do metabolismo celular. No segundo estudo, suspensões de C. albicans foram tratadas com a cloro-alumúnio ftalocianina (ClAlFt) na concentração de 31,8 µM encapsulada em nanoemulsões (NE) de caráter catiônico e aniônico e a ClAlFt livre por 30 minutos no escuro. Em seguida, as amostras foram centrifugadas para remoção do fármaco e 300 µl de solução salina foi adicionado previamente à irradiação com LED (660 ± 3 nm; 50 e 100 J/cm2 ). Amostras controle negativo não foram expostas a ClAlFt nem luz. Para as soluções planctônicas, as colônias foram determinadas (UFC/mL) após 48 horas de incubação. Além disso, o metabolismo celular foi avaliado por meio do teste de XTT e a técnica de citometria de fluxo foi utilizada para avaliar danos a membrana celular. Para os biofilmes, a atividade metabólica foi avaliada pelo XTT e a distribuição da ClAlFt utilizando os diferentes veículos no interior dos biofilmes foi analisada por microscopia confocal. Os dados de CFU/mL e os valores de absorbância obtidos pelo teste de XTT foram analisados pelo Kruskal-Wallis e teste de comparações múltiplas dos postos médios. Já para a citometria de fluxo foi utilizado ANOVA um critério (α= 0,05%). A viabilidade fúngica foi dependente do veículo, da carga superficial e dose de luz. A ClAlFt livre inativou completamente o fungo quando associada a maior dose de luz. Já a NE catiônica causou redução significativa tanto de CFU/mL (~ 3,1 log) quanto do metabolismo celular em cerca de 92,3% quando comparada ao controle (p<0,05). Além disso, ambas as veiculações resultaram em danos a membrana citoplasmática significativos (p<0,05). Para os biofilmes, a NE catiônica resultou em redução de 70% do metabolismo. A FS aniônica não apresentou atividade antifúngica. As imagens obtidas pela microscopia confocal demonstraram diferentes padrões de acúmulo e intensidade de fluorescência no interior dos biofilmes para os diferentes sistemas de veiculação de fármacos avaliados. No estudo 3, suspensões e biofilmes de MSSA e MRSA foram tratados com a ClAlFt livre e com os sistemas de NE catiônico e aniônico contendo esse fármaco. Após o período de pré-incubação, o fármaco foi removido e a irradiação foi realizada por um sistema de LED (660 ± 3 nm). Para as suspensões planctônicas bacterianas, foi avaliado o número de unidade formadoras de colônias (UFC/mL) e o metabolismo celular pelo teste de XTT. Já para os biofilmes, foi avaliado o metabolismo pelo XTT. Assim como para o fungo, a eficiência da PDT foi dependente do veículo, carga superficial e dose de luz. A NE catiônica e a ClAlFt livre causaram completa inativação de ambas as cepas de S. aureus. Para os biofilmes, a NE catiônica reduziu em cerca de 80 e 73% o metabolismo celular da cepa susceptível e da resistente, respectivamente. A NE aniônica, apesar de reduzir em cerca de 4 log e 1 log o número de UFC/mL para o MSSA e MRSA, respectivamente, não causou redução do metabolismo dos biofilmes do MRSA mesmo quando associada a maior dose de luz avaliada. Esses resultados sugerem que a NE catiônica representa uma veiculação viável para inativação de fungos e bactérias, incluindo cepas resistentes aos tratamentos convencionais

The aim of this investigation was to evaluate: 1. the Photodynamic Therapy (PDT) mediated by curcumin for in vitro inactivation of methicillin-resistant S. aureus (MRSA) and susceptible S. aureus (MSSA) and its citotoxic effects against L929 fibroblasts; 2. the photodynamic potential of aluminum-chloride-phthalocyanine (ClAlPc) entrapped in cationic and anionic nanoemulsions (NE) to inactivate C. albicans planktonic and biofilm cultures compared with free ClAlPc; 3. the photodynamic effect of ClAlPc encapsulated in NE on methicillin susceptible and resistant S. aureus suspensions and biofilms. In the first study, suspensions of MSSA and MRSA were treated with different concentrations of curcumin and exposed to LED. Serial dilutions were obtained from each sample, and colony counts were quantified. For fibroblasts, the cell viability subsequent to the curcumin-mediated photodynamic therapy was evaluated using the MTT assay and morphological changes were assessed by SEM analysis. Curcumin concentrations ranging from 5.0 to 20.0 µM in combination with any tested LED fluences resulted in photokilling of MSSA. However, only the 20.0 µM concentration in combination with highest fluence resulted in photokilling of MRSA. This combination also promoted an 80% reduction in fibroblast cell metabolism and morphological changes were present, indicating that cell membrane was the main target of this phototherapy. In the second study, fungal suspensions were treated with different types of delivery systems containing ClAlPc. After 30 minutes, the drug was washed-out and samples were illuminated with LED source (660 ± 3 nm). Negative control samples were not exposed to ClAlPc or light. For planktonic suspensions, colonies were counted (CFU/ml) and cell metabolism was evaluated by XTT assay. (Kruskal-Wallis and Multiple Comparison test; α= 0.05%). Flow cytometry was used to evaluate damage to cell membrane. (One-way ANOVA; α= 0.05%). For biofilms, the metabolic activity was evaluated by means of XTT reduction assay and ClAlPc distribution using the different delivery systems through three-dimensional architecture of the biofilms were analyzed by confocal laser scanning microscopy (CLSM). Fungal viability was dependent on the delivery system, superficial charge and light dose. Free ClAlPc caused photokilling of the yeast when combined with a higher light dose. Cationic NE-ClAlPc reduced significantly both CFU/mL (~3.1 log10) and cell metabolism (92.3%) compared with the negative control (p<0.05). In addition, cationic NE-ClAlPc and free-ClAlPc caused significant damage to the cell membrane (p<0.05). For the biofilms, cationic NE-ClAlPc reduced cell metabolism by 70%. Anionic NE-ClAlPc did not present antifungal activity. CLSM showed different accumulation and fluorescence intensities emissions on biofilm structure for the evaluated delivery systems. In the third study, suspensions and biofilms of MRSA and MSSA were treated with different delivery systems containing ClAlPc. After the preincubation period, the drug was washed-out and irradiation was performed with LED source (660 ± 3 nm). Negative control samples were not exposed to ClAlPc or light. For the suspensions, colonies were counted (CFU/mL). The metabolism of S. aureus suspensions and biofilms were evaluated by the XTT assay. The efficiency was dependent on the delivery system, superficial load and light dose. Cationic NEClAlPc and free-ClAlPc caused photokilling of the both strains of S.aureus. For biofilms, cationic NE-ClAlPc reduced cell metabolism by 80 and 73% of susceptible and resistant strains, respectively. Although anionic NE-ClAlPc caused a significant CFU/mL reduction for MSSA and MRSA, it was not capable of reducing MRSA biofilm metabolism. ClAlPc entrapped in cationic NE or in its free form combined with LED caused photokilling of both S. aureus strains evaluated and reduction of the metabolic activity of biofilms. This therapy may represent an alternative treatment for eradicating resistant strains

Avaliação da citotoxicidade trans-amelodentinária de um gel de peróxido de carbamida a 10 / Trans-enamel and trans-dentinal cytataxicity af a 70 carbamide peroxide an adantablast-like cells

Objetivo: avaliar a citotoxicidade trans-amelodentinária de um gel clareador com 100/0 de peróxido de carbamida (PC) sobre células odontoblastóides MDPC-23. Materiais e Métodos: Discos de esmalte/ dentina, obtidos de incisivos bovinos, foram adaptados em câmaras pulpares artificiais. O gel clareador em estudo foi aplicado por 8 horas diárias sobre a superfície de esmalte, pelos períodos de 1,7 ou 14 dias. Os extratos (meio de cultura contendo os produtos do gel clareador que se difundiram através do esmalte e dentina) foram aplicados por 1 hora sobre as células MDPC-23 previamente cultivadas. Meio de cultura puro foi utilizado como grupo controle. O metabolismo celular (teste de MTI) e a morfologia das células (MEV) pós-clareamento foram avaliados. Os dados obtidos foram estatisticamente analisados (Anova um critério e teste de Tukey; a=5%). Resultados: Não foi observada diferença estatisticamente significante entre o grupo controle e os grupos experimentais (p>O,051, sendo que nenhuma diferença estatisticamente significante ocorreu quando se comparou os diferentes períodos de aplicação do gel clareador (1,7 ou 14 dias) entre si (p>O,05). Conclusão: De acordo com a metodologia empregada na presente pesquisa, foi possível concluir que o gel clareador com 10% de PC não causou efeito citotóxico significante para as células MDPC-23, independente do número de aplicações do produto sobre a estrutura dental.

Aim: The purpose of this in vitro study was to evaluate the trans-enamel and trans-dentinal cytotoxic effects of a 10% carbamide peroxide bleaching on MDPC-23 cells, applied for different periods on the enamel surface. Material and Methods: Enameljdentin discs obtained from bovine incisors were adapted to artificial pulp charnbers Bleaching gel with 10% carbamide peroxide was applied for 8 hours daily on the enamel surface, for the periods of 1,7 or 14 days. The extracts (culture medium + products of bleach- ing gel that reached the pulpal space) were applied for 1 hour on previously cultured MDPC-23 cells. Cell metabolism and cell morphology were evaluated by MTI assay and SEM, respectivelv The data obtained from MTI assay were analyzed statistically (a=5%; One way anova; Tukey's testl Results: There was no statistically significant difference between control group and experimental groups submitted to bleaching procedures (p>0.05). There was not also significant difference among the different periods of gel applica- tion (1,7 or 14 days) (p>0.05). Conclusion: According to the methodology employed in this in vitro study, it was possible to conclude that the bleaching gel with 10% carbamide peroxide caused no significant cytotoxic effect to MDPC-23 cells, regardless the number of applications on the enamel surface.

Limpeza do forame e extrusão apical de raspas de dentina em dentes unirradiculares submetidos ao procedimento de patência apical / Cleaning of the foramen apical and apical extrusion of dentin chips in single-rooted teeth subjected to apical patency

Objetivo: Verificar a limpeza do forame e a extrusão periapical de raspas de dentina em dentes unirradiculares instrumentados por duas diferentes técnicas sendo que uma delas continha o procedimento de patência apical. Método: Foram selecionados 30 dentes corados internamente com nanquim, divididos em dois grupos, sendo somente o grupo I submeti do a patência apical. A extrusão das raspas de dentina foi coletada em um recipiente de vidro para mensuração. A região do forame apical dividida em quadrantes foi analisada por meio de microscópio estereoscópico para verificar a ação do instrumento sobre suas paredes. O número de paredes limpas (sem nanquim) recebeu pontuação de 0 a 4, sendo a pontuação 0 correspondente a nenhuma parede limpa. Resultados: No grupo I, não houve presença de plug dentinário, porém somente 1 dente obteve pontuação 4. No grupo II, 10 dentes apresentaram plug dentinário e todos receberam pontuação 0. A massa de dentina extruída não mostrou diferença significativa (teste Scheff e p<0,05) entre os grupos I e II. Conclusão: O emprego da patência apical em dentes unirradiculares não modifica a quantidade de raspas de dentina extruídas pelo forame apical, não produz limpeza adequada nas paredes do canal cementário, porém remove o tampão de raspas de dentina do canal cementário.

Objective: To verify the cleaning of the apical foramen and apical extrusion of dentin chips in single-rooted teeth instrumented with two techniques, one of which including the apical patency procedure. Method: Thirty teeth were internally stained with Indian ink, divided in two groups, of which only group I was subjected to apical patency. The dentin chips extruded through the apical foramen were collected in a glass receptacle and quantified. The apical foramen region was divided in quadrants and analyzed with a stereomicroscope to verify the action of the instrument on the cemental canal walls. The teeth were scored 0 4 according to the number of clean walls (without Indian ink), 0 corresponding to no clean wall. Results: In group I, there was no dentin plug, but only 1 tooth was scored 4. In group II, 10 teeth presented dentin plug and all of them were scored 0. There was no statistically significant difference between groups I and II regarding the extruded dentin mass (Scheff ‚ test; p<0.05). Conclusion: The use of the apical patency procedure in singlerooted teeth does not modify the amount of dentin chips extruded through the apical foramen, does not produce an adequate cleaning of the cemental canal walls, but remove the plug of dentin chips from the cemental canal. Tooth apex; Root canal preparation; Endodontics.

Clinical performance of indirect esthetic inlays and onlays for posterior teeth after 40 months

Aim: Searches for biocompatible restorative materials with better clinical properties, longevity and esthetics have resulted in the development of several ceramic types. The aim of this study was to evaluate the performance of Ceramco inlays and onlays over 40 months. Methods: Thirty ceramic indirect restorations were placed in 10 patients and all were adhesively cemented with a dual resin cement. The clinical performance was evaluated by a calibrated examiner who attributed scores adapted from the Cvar and Ryge criteria: color, marginal adaptation, abrasion, caries recurrence, fracture and postoperative pain. These assessments were performed after cementation of the restorations (T₀=baseline) and after 4 periods: T₁ (10 months), T₂ (20 months), T₃(30 months) and T₄ (40 months). Photographs were made in T₀ and T₄ to illustrate the general condition of each restoration. Data were analyzed statistically by Kruskal-Wallis H statistics (p=0.05) and results were presented using percentage values. Results: Clinical evaluation revealed no color alteration or abrasion (100%); a success rate of 96.7% for caries, fractures and postoperative pain; and 76.7% of failure for marginal adaptation. Conclusion: The ceramic restorations did not show alterations that could result in their replacement, although there was a moderate failure in the marginal adaptation.

Indirect cytotoxicity of a 35 percent hydrogen peroxide bleaching gel on cultured odontoblast-like cells

The aim of this study was to evaluate the trans-enamel and trans-dentinal effects of a 35 percent hydrogen peroxide (H2O2) bleaching gel on odontoblast-like cells. Enamel/dentin discs obtained from bovine incisors were mounted in artificial pulp chambers (APCs). Three groups were formed: G1- 35 percent H2O2; G2- 35 percent H2O2 + halogen light application; G3- control. The treatments were repeated 5 times and the APCs were incubated for 12 h. Then, the extract was collected and applied for 24 h on the cells. Cell metabolism, total protein dosage and cell morphology were evaluated. Cell metabolism decreased by 62.09 percent and 61.83 percent in G1 and G2, respectively. The depression of cell metabolism was statistically significant when G1 and G2 were compared to G3. Total protein dosage decreased by 93.13 percent and 91.80 percent in G1 and G2, respectively. The cells in G1 and G2 exhibited significant morphological alterations after contact with the extracts. Regardless of halogen light application, the extracts caused significantly more intense cytopathic effects compared to the control group. After 5 consecutive applications of a 35 percent H2O2 bleaching agent, either catalyzed or not by halogen light, products of gel degradation were capable to diffuse through enamel and dentin causing toxic effects to the cells.

O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos citotóxicos de um agente clareador com 35 por cento de peróxido de hidrogênio (H2O2) sobre células da linhagem odontoblástica. Foram confeccionados discos de esmalte/dentina obtidos de incisivos bovinos, os quais foram posicionados em câmaras pulpares artificiais (CPAs). Três grupos foram formados: G1: gel clareador; G2: gel clareador + luz halógena e G3: controle. Após 5 aplicações consecutivas do gel clareador sobre o esmalte, os extratos foram obtidos e aplicados por 24 h sobre as células. Foram realizadas avaliações do metabolismo celular, morfologia das células e expressão total de proteína. O metabolismo celular para G1 e G2 reduziu em 62,09 por cento e 61,83 por cento, respectivamente. A redução do metabolismo celular foi estatisticamente significante quando se comparou G1 e G2 com G3. A expressão de proteína total reduziu em 93,13 por cento e 91,80 por cento para G1 e G2, respectivamente. As células em G1 e G2 apresentaram importantes alterações morfológicas após contato com os extratos. Foi possível concluir que independente da catalização ou não do gel clareador por luz halógena, os componentes que se difundiram através dos tecidos duros do dente após sua quinta aplicação sobre o esmalte, causaram intensos efeitos citotóxicos para as células.

Efeito citotóxico da terapia fotodinâmica associando Photogem® e LED azul e vermelho em cultura de células normais / Cytotoxic effect of the photodynamic therapy associating Photogem® and blue or red LED on normal cell culture

Para considerar a Terapia Fotodinâmica (PDT) como tratamento clínico da estomatite protética, é necessário conhecer tanto o potencial antifúngico, como efeito citotóxico desta terapia sobre células normais do indivíduo. Assim, o objetivo desse estudo in vitro foi avaliar a citotoxicidade da PDT antifúngica com o fotossensibilizador Photogem® associado ao LED azul e ao LED vermelho em cultura de fibroblastos L929 e células odontoblastóides MDPC-23. As células foram cultivadas (30.000 células/cm2) em placas de 24 compartimentos por 48 horas e ambos os tipos celulares foram incubados com Photogem® (0, 10, 25, 50, 100 ou 150 mg/L) e irradiados ou não pelo LED azul (460 ± 3 nm; 25,5 ou 37,5 J/cm2; 22 mW/cm2) ou LED vermelho (630 ± 3 nm; 70 ou 100 J/cm2; 25 mW/cm2) . O metabolismo celular foi determinado 0, 12 e 24 horas após a PDT utilizando o teste do metiltetrazolium (MTT), e a morfologia celular avaliada pela microscopia eletrônica de varredura (MEV). A técnica de citometria de fluxo foi utilizada para avaliar o tipo de morte celular (necrose ou apoptose) assim como estimar os níveis intracelulares das espécies reativas de oxigênio (EROs). Observou-se redução do metabolismo celular estatisticamente significante para todas as concentrações do Photogem® quando irradiadas em qualquer dose de luz, sendo essa redução de 90 a 97% tanto para as células L929 quanto MDPC-23 (ANOVA and Dunnet's post hoc tests; p<0.05). Essa redução da atividade mitocondrial não foi dependente da concentração do fotossensibilizador e nem da dose de luz empregada. Também, foi demonstrado que a atividade mitocondrial das células submetidas a PDT não foi recuperada após 12 ou 24 horas, caracterizando um dano irreversível. A presença do Photogem® e da luz isoladamente não alterou estatisticamente a atividade mitocondrial de ambas as linhagens. As células submetidas à PDT tiveram sua morfologia alterada, não sendo possível observação dos limites celulares. Em ambas as linhagens, foi observado predomínio de morte celular por necrose quando em contato com o fotossensibilizador. A presença do Photogem® e a exposição à luz aumentaram os níveis de EROs intracelulares de uma forma dosedependente para L929 e MDPC-23. A associação do Photogem® com LED azul ou vermelho causou intensos efeitos tóxicos sobre cultura de células normais, caracterizados pela redução da atividade mitocondrial, alterações morfológicas e indução de morte celular por necrose

In order to consider the photodynamic therapy (PDT) as a clinical treatment for candidosis, it is necessary to know its antifungal potential and its cytotoxicity effect on normal cells. Therefore, the purpose of this in vitro study was to evaluate the cytotoxicity of PDT with Photogem® associated to blue and red LED on L929 and MDPC-23 cell cultures. The cells (30.000 cells/cm2) were seeded in 24-well plates for 48 hours, incubated with Photogem® (10, 25, 50, 100 or 150 mg/L) and were irradiated or not with a blue LED source (460 ± 3 nm; 25.5 or 37.5 J/cm2; 22 mW/cm2) or with a red LED source (630 ± 3 nm; 75 or 100 J/cm2; 22 mW/cm2). Cell metabolism was evaluated by the MTT assay (ANOVA and Dunnet's post hoc tests; p<0.05) and cell morphology was examined by scanning electron microscopy. Flow cytometry was employed to analyze the type of PDT-induced cell death (necrosis or apoptosis) as well as to estimate intracellular production of reactive oxygen species (ROS). There was a statistically significant decrease of mitochondrial activity for all Photogem® concentrations associated to blue or red LED regardless irradiation time; this reduction ranged from 90 to 97% for both cell lines. This reduction, however, was not dependent on the photosensitizer concentration. It was also demonstrated that the mitochondrial activity of the cells submitted to PDT was not recovered after 12 or 24 hours, characterizing irreversible cell damage. PDT-treated cells presented an altered morphology with ill-defined limits. In both cell lines, there was a predominance of necrotic cell death when in contact with the photosensitizer. The presence of Photogem® and exposure to blue and red LED increased the intracellular levels of ROS in both L929 and MDPC23 cells in a dose-dependent manner. The association of Photogem® and blue LED caused severe toxic effects on normal cell culture, characterized by the reduction of the mitochondrial activity, morphological alterations and induction of necrotic cell death

External location of the buccinator muscle to facilitate electromyographic analysis

Electromyography is frequently used to measure the activity of masticatory muscles. It requires the precise setting of the electrodes, which demands the accurate location of the muscle to be evaluated. The purpose of this study was to investigate the accuracy of an external method to locate the buccinator muscle. Fifteen human cadavers were evaluated and planes were determined on the face using anatomic landmarks. An angle (a) was obtained at the intersection of these planes on the central point of buccinator muscle and measured with a protractor. The value of the angle allows locating the central point of buccinator muscle based on anatomic landmarks on the face. Statistical analysis of the collected data indicated an angle of 90º with 95 percent reliability, thus proving the efficacy of the proposed method.

A eletromiografia é frequentemente utilizada para mensurar a atividade dos músculos mastigatórios. Esta análise exige a colocação precisa dos eletrodos, o que requer a localização exata do músculo a ser avaliado. O objetivo do presente estudo foi investigar a acurácia de um método externo para localização do músculo bucinador. Quinze cadáveres humanos foram avaliados e planos foram determinados na face utilizando-se pontos de referência anatômicos. Um ângulo (a) foi obtido na interseção desses planos no ponto central do músculo bucinador e foi medido com um transferidor. O valor do ângulo permite localizar o ponto central do músculo bucinador baseado nos pontos de referência anatômicos da face. A análise estatística dos dados obtidos indicou um ângulo de 90º com 95 por cento de confiabilidade, confirmando dessa forma a eficácia do método proposto.